ELISA（酶联免疫吸附试验）是一种生物医疗领域中广泛使用的实验技术，用于检测和定量分析样品中特定抗原或抗体的存在。该技术基于免疫学原理，具备高灵敏度和高特异性。然而，有时实验结果可能出现阴性孔吸光光度值异常偏高的问题。以下是一些常见原因及处理建议：

1. 洗板不干净

解决方法：确保充分洗涤，在洗板时延长时间并增加洗涤频率，同时可在洗液中添加Tween-20表面活性剂。保持每一步洗涤的完整性，并彻底拍打以消除孔内残留液体。

2. 显色液变质或试剂过期

解决方法：检查试剂盒的有效期，使用新的试剂盒并按照说明书保存每项试剂。每次使用后最好不回收显色液，或确保其回收至干净的容器中。

3. 试剂稀释不当

解决方法：按说明书推荐的稀释倍数进行抗体稀释，以避免检测抗体或酶结合物的浓度过高。

4. 试剂盒组分未平衡

解决方法：在实验前，确保每个组分在室温下平衡。

5. 混用不同试剂盒的试剂

解决方法：确保实验中仅使用完整的同一套试剂，避免不同品牌或批次的试剂混用。

6. 蒸馏水受污染

解决方法：使用新鲜的蒸馏水，以防止酶等污染。

7. 培养箱温度过高或反应时间过长

解决方法：检查恒温箱，确保温度稳定在37℃，并遵循说明书规定的反应时间，以减少非特异性结合的增加。

8. 酶标板底部有污渍

解决方法：在检测前，用75%乙醇浸润的脱脂棉球擦拭酶标板底部，确保没有污渍。

9. 洗液污染

解决方法：尽量现配现用洗液，长期存放可能导致析出及污染，进而影响实验结果。

10. 包被的抗原污染

解决方法：回顾操作过程并更换新的抗原包被。

11. 封闭液、封闭时间及浓度

解决方法：调节封闭液（BSA）的浓度和封闭时间，确保封闭彻底，以减少背景信号。

12. 抗体选择不当

解决方法：使用优质、高特异性的抗体，如采用0.8%的明胶替代BSA，选择与酶标单抗同种属的多克隆抗体，以降低背景干扰。

13. 酶标仪参数设置不当

解决方法：核实酶标仪设置的波长，确保根据说明书要求进行参数设置，以获得准确的测量值。

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