一、概念

1. 细胞系（Cell Line）：细胞系是经过第一次成功传代后的原代细胞培养，主要由原代培养物中的细胞世系（Lineage of Cells）组成。

2. 细胞株（Cell Strain）：细胞株是通过选择法或克隆技术从原代培养物或细胞系中获得的，具备特定性质或标志物。当细胞株的特性在整个培养期间保持稳定时，便可以确认其为细胞株。如果细胞株在传代过程中受到限制或无法继续传代，则称为有限细胞株（finite cell strain）；而可以进行连续传代的则称为连续细胞株（continuous cell strain）。对于人类肿瘤细胞，若其在体外培养超过六个月并保持生长稳定且能够连续传代，则可称之为连续性株或系。

二、建立细胞系（或株）的要求

细胞系或细胞株被认可为已鉴定的标准并无统一规定，具体标准视情况而定。对于原代培养细胞而言，只需确保供体的均一性以及取材部位和组织种类的稳定即可；而对于长期培养，特别是需反复传代的细胞，通常需提供以下信息：

1. 组织来源：说明细胞供体的所属物种、性别、年龄，以及取材的器官或组织。如果为肿瘤组织，则需附上临床和病理诊断信息，包括病历号等。

2. 细胞生物学检测：研究细胞的一般生物学性状和特异性，如细胞的形态、特征结构、生长曲线、分裂指数和倍增时间等。如果为肿瘤细胞，需通过软琼脂培养、异体接种致瘤试验等，证明其来源于原肿瘤组织并保持恶性状态。

3. 培养条件和方法：详细说明细胞系或细胞株的适应环境，包括使用的培养基、血清种类、用量及合适的pH值。

三、细胞建立的要点及基本过程

(一) 肿瘤细胞培养的技术要点：

1. 取材：材料应主要来源于外科手术或活检的肿瘤组织。在取材时，应避免坏死组织，选择瘤细胞活力较强的部位，如淋巴结转移或胸腹水，这些都是优质的培养材料。取材后应尽快进行培养，若无法立即处理，则需进行冷冻保存，培养和冷冻的方法可参考正常组织。

2. 成纤维细胞排除：肿瘤组织中常伴有成纤维细胞，这些细胞可以与肿瘤细胞共同生长，甚至抑制肿瘤细胞的生长。因此，需仔细剔除成纤维细胞，常用的方法有机械刮除、反复贴壁、消化排除和胶原酶消化法等。

3. 提高肿瘤细胞的存活率和生长率：根据实验经验，肿瘤细胞在体外培养较为困难，建立可以传代的肿瘤细胞系更具挑战性。通常，在原代培养后，细胞需对新环境进行适应，因此除了常规培养法外，还需采取特殊措施，如使用适合的底物（鼠尾胶原底层或饲细胞底层），以及添加细胞生长因子（如胰岛素、氢化可的松和雌激素等），甚至可以考虑动物媒介培养。

(二) 人类淋巴母细胞建株方法：

1. 将4ml肝素抗凝血加入离心管中，再加入2ml RPMI 1640培养基。

2. 混匀后，将其沿管壁缓慢加入4ml淋巴细胞分离液的表面，静置30分钟。

3. 以1500 rpm离心15分钟，吸取白细胞层（第二层）到另一个离心管中。

4. 添加5ml RPMI 1640，洗涤白细胞两次。

5. 将白细胞接种至1ml RPMI 1640培养基中，加入10μl环胞霉素和100μl的EBV液，混匀。

6. 将混合液于水浴摇床中，设定温度37℃，速率40次/分钟，培养3小时。

7. 以1500 rpm离心15分钟，然后将细胞接种至1ml培养基中（含1mM/ml谷氨酰胺），加入10μl环胞霉素，轻轻混匀，37℃培养。

8. 观察细胞转化和生长情况，一般在5天后进行半量换液，通常换液1-2次，并保持环胞霉素浓度。

9. 待转化细胞数量显著增加并出现细胞团块后，可移入25ml细胞培养瓶中，加1-2ml培养基，保持37℃培养10-15天，通常每隔3-4天观察一次，以决定是否换液和传代。

10. 在细胞达到足够数量后，进行冷冻保存，保存之前应进行核型分析和存档。

通过上述细胞培养技术，结合金年会金字招牌诚信至上的理念，可以有效提高细胞系和细胞株的建立质量，推动生物医学研究的进展。这样，不仅能确保实验的规范性，还能促进医学界对肿瘤及其它疾病的深入理解与研究。